Inmunoglobulina M

PRÁCTICA - 10

Determinación cuantitativa de inmunoglobulina M (IgM)

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

Los anticuerpos IgM forman compuestos insolubles cuando se combinan con la IgM de la muestra del paciente,ocasionando un cambio de absorbancia proporcional a la concentración de IgM en la muestra, y que puede ser cuantificada por comparación con un calibrador de Ig M de concentración conocida.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La IgM es la única inmunoglobulina que sintetiza un recién nacido. En adultos representa el 5-10% del total de inmunoglobulinas. Su estructura es pentamérica y su elevado peso molecular (900000 daltons) evita su paso a espacios extravasculares.

Su concentración se halla disminuida en enfermedades relacionadas con deficiencias hereditarias o adquiridas en la producción de inmunoglobulinas.
La respuesta normal a las infecciones consiste en aumentar la producción de inmunoglobulinas. La IgM generalmente aumenta en infecciones víricas e infecciones del torrente circulatorio como la malaria y la cirrosis biliar primaria. En caso de mieloma múltiple, si la paraproteína es una IgM, probablemente se trata de una macroglobulinemia de Waldenström. Las crioglobulinemias de origen monoclonal, son generalmente debidas a IgM 

REACTIVOS:

• Diluyente (R1)
• Anticuerpo (R2)

PREPARACIÓN:

Se prepara una curva de calibración:

MATERIAL ADICIONAL:

• Espectofotómetro
• Pipetas
• Puntas de pipetas.

MUESTRA:

• Suero fresco

PROCEDIMIENTO:

1.Atemperar los reactivos.

2.Preparar las condiciones de ensayo:

• Longitud de onda a 340 nm
• Temperatura a 37ºC
• Paso de luz de la cubeta: 1cm

3.Ajustamos el espectofotómetrp a cero frente a agua destilada

4.Pipetear en una cubeta:

• Reactivo R1: 800 ul
• Muestra o calibrador: 10ul

5.Mezclar y leer la absorbancia después de la adiciín de la muestra:

• A1.1: 0.375
• A1.2:0.401

6.Inmediatamente después pipeteamos en la cubeta: 

• Reactivo R2 : 200ul

7. Mezclamos y leemos la absorbancia exactamente despues de 2 minde añadir el reactivo R2

• A2.1: 0.598
• a2.2: 0.463

X= 5.3 ml/dl