Waaler Rose

PRÁCTICA Nº2  1/10/19

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE FACTORES REUMATOIDES (FR)

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

El Waaler rose es una técnica de hemaglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de FR en suero humano. Los hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo anti-hematíe de oveja son aglutinados por FR presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

Los factores reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fracción Fc de las inmunoglobulinas G. Aunque se hallan presentes en un gran número de desordenes reumáticos, tales como el lupus eritematoso sistémico (SLE) y el síndrome de Sjögren, su principal interés clínico radica en el diagnostico de la artritis reumatoide (RA).

Un estudio actual realizado por el "American College of Rheumatolgy) demostró que el 80,4% de pacientes con artritis reumatoide fueron positivos para el FR.

REACTIVOS:

Waaler Rose: suspensión hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo anti-hematíe de oveja pH, 8.2. Conservante.
Control + (tapón rojo): Suero humano con una concentración de FR>30 Ul/mL. conservante.
Control - (tapón azul): suero animal de conejo. Conservante.

PROCEDIMIENTO:

Método cualitativo:

1.  Atemperar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50ul de la muestra a ensayo y una gota de cada uno de los controles Positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de WR antes de usar. Depositamos una gota de 50ul junto a casa una de las gotas anteriores.
4.  Mezclar las gotas con un palillo, extendiendo la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situamos el porta sobre una superficie plana durante 2min.
6. Inmediatamente después , inclinamos el porta unos 45º de la horizontal y lo dejamos nuevamente en reposo durante 1 minuto.

Método semicuantitativo:

1. Realizamos diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/l.
2. Depositamos 50ul de la muestra a ensayo a una gota de cada uno de los controles positivos y negativo y el suero sobre los círculos.
3. Homogeneizamos suavemente el reactivo de WR antes de usar y depositamos una gota de 50ul solo en el primer círculo del porta
4. Mezclamos las gotas con un palillo, extendiendo la mezcla por toda la superficie anterior del círculo. y cogemos 50ul de esa disolución para pasarlo al siguiente circulo hasta llegar al ultimo del que se desecharan los últimos 50 ul. Para cada muestra empleamos palillos distintos.
5. Situamos el porta sobre una superficie plana durante 2 min.
6. Inmediatamente después, inclinamos el porta unos 45º de la horizontal y lo dejamos nuevamente en reposo durante 1 min.