Rubeola

Practica 13

Rubeola IgG - ELISA

Componentes del kit

• Microtiras de IgG recubiertas de Ag de rubeola
• Calibradores (A-E): suero humano diluido con PBS: 0-10-50-200-500 UI/ml (listos para usar)
• Conjugado de IgG antihumano (15ml): Antígeno Ig G antihumano de conejo. (listo para usar)
• Sustrato
• Solución de parada
• Solución diluyente para la mjuestra
• Solución de lavado (10x)
• Muestras: suero o plasma que hay que diluirlas con el diluyente en una dilución 1:10, es decir cpn 5 ul de muestra en 500 ul de diluyente.

Procedimiento

1. Preparación de reactivos:
Preparamos una solución de lavado del 1:9 

2. Técnica

1º Preparamos un pocillop para sustrato blanco (1º pocillo), un pocillo para los calibradores (5 siguientes pocillos) y otro para la muestra (último)

2º Preparamos 100 ul en cada pocillo de calibradores a excepción del blanco.

3º Cerramos la placa a temperatura ambiente durante 1 hora.

4º Después de incubar, aspiramos o volcamos los líquidos de las tiras y los lavamos 3 veces echando 300 ul de solución de lavado.

5º Pipeteamos 100 ul de conjugado Anti-Ig G, con excepción del blanco.

6ºTapar e incubar 30 min a Tº ambiente

7º Repetimos el paso 4

8º Pipeteamos 100ul de sustrato en todos los pocillos incluido el blanco.

9º Tapamos e incubamos 20 min en la oscuridad 

10º Pipeteamos 100ul de solución de parada, incluido el blanco.

11ºMedimos la absorbancia de todos los pocillos a 450 nm

Cálculos: