Peroxidasa

Practica 15

Detección de la reacción de la peroxidasa en leucocitos.

Principio

Sirve de indicador para la presencia de elementos celulares mieloicos. El grado de madurez de los granulocitos en maduración puede ser estimado esencialmente según la intensidad de la rección cromática pardo-negruzca.

Las peroxidasas son catalasas lisosomales que transfieren el hidrógeno desde un donador adecuado a un peróxido. Entonces el donador 4-cloro-1-naftol se oxida y se transforma en un colorante insoluble pardo negruzco,. que puede utilizarse como indicador de la correspondiente actividad de peroxidasa.

Material

• Componentes del Kit
• Sangre sin anticuagulante

Preparación de la muestra

1. Hacemos un frotis sanguíneo, con sangre capilar
NOTA: nosotras aquí nos equivocamos, ya que cogimos capilares con anticuagulante

2. Dejamos secar durante 30 min.

3.Fijamos los frotis sanguíneos en la mezcla fijadora LUCOGNOST durante 1-3 min.

4. Enjuagamos con agua corriente del grifo y dejamos secar.

Preparación de los reactivos

Preparamos 60ml de solución con:

• Reactivo (todo el frasco)

• Etanol - 15ml

• Agua destilada 45 ml

• Reactivo 2 - 10 gotas

• Reactivo 3 - 2 gotas

Técnica

1º Introducimos los frotis en la solución de tinción recién preparada durante 10 min
2º Enjuagar con agua destilada 10 segundos
3º Secar al aire
4ºIntroducmos los portas en una contratinción con hemalumbre en solución según Mayer duranteb 2 min.
5º Enjuagamos con agua corriente del grifo durante 5 min
6º Secamos al aire y observamos a microscopio.