TPHA

PRACTICA - 8

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTI-TREPONEMA PALLIDUM.

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

TPHA (Treponema Pallidum Haemagglutination) es una prueba de hemoaglutinación indirecta en microplaca para la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos específicos anti-Treponema pallidum en suero humano. Los hematíes de ave sensibilizados y estabilizados con una solución antigenica de T. pallidum, aglutinan en presencia de anticuerpos anti-T pallidum mostrando unos patrones de aglutinación característicos.

SIGNIFICADO CLÍNICO: 

La sífilis es una enfermedad venérea provocada por la infección con T. pallidum. La transmisión de microorganismos se produce por contacto directo a través de una lesión productiva. El periodo de incubación es aproximadamente 20 días y la enfermedad progresa a través de 3 fases distintas con sintomatología diferente. Los anticuerpos anti-treponema aparecen a partir de la primera fase y pueden permanecer en un 85-90% de pacientes tratados a pesar de haber superado la enfermedad. 

REACTIVOS:

• R1: células Test (TC)
• R2: Células control (CC)
• R3: Diluyente (DIL)
• Control +
• Control -

MATERIAL ADICIONAL:

• Placas de microtitulación con fondo de U 
• Pipetas de 25-75 ul.

MUESTRA:

• Suero fresco

PROCEDIMIENTO:

1.Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente 

2.Preparar una dilución 1:20 de la muestra en Diluyente (10ul suero +190 ul diluyente)

3.Pipetear en pocillos adyacentes de una placa de microtitulación 

4. Agitar suavemente la placa hasta la completa homogenización de las mezclas.

5. Cubrir la placa e incubar a temperatura ambiente durante 45-60 min

6.Examinar macroscópicamente las patrones de aglutinación de las células.